FICHE DE DONNÉES

Catalogue #

Mab5091

Arrière-plan

Les coronavirus sont une famille de virus à ARN enveloppés de polarité positive, mesurant entre 60 et 140 nm de diamètre. Leur surface est recouverte de protéines de spicule trimériques, ce qui leur confère un aspect en couronne au microscope électronique. Chaque protéine de spicule peut être clivée en deux sites : S1/S2 et S2'. S1 est responsable de la liaison au récepteur de la cellule hôte, tandis que S2 assure la fusion des membranes virale et cellulaire. L'enzyme de conversion de l'angiotensine 2 (ACE2) a été identifiée comme le récepteur du SARS-CoV-1 et du SARS-CoV-2, ce dernier étant responsable de la COVID-19. Le domaine de liaison au récepteur (RBD) est un sous-domaine de S1, qui interagit avec le site de liaison extracellulaire de l'ACE2, appelé domaine peptidase (PD). Cette interaction est essentielle à la transmission du virus et est donc considérée comme une cible principale pour le développement de médicaments antiviraux.

Source

Il s'agit d'un anticorps monoclonal de souris produit contre le peptide synthétique V₆₈₇ASQSIIAYTMSLGAENS₇₀₄ de la protéine Spike du SRAS-CoV-2.

Symbole du gène

SPIKE_SARS2

Isotype

IgG₁

Forme physique

Poudre lyophilisée à partir d'une solution PBS 1 #215;

Spécificité

Cet anticorps détecte la protéine de pointe du SARS-CoV-2, mais pas celle du SARS-CoV-1.

Poids moléculaire

141 kDa (pleine longueur), mais il apparaît comme ~180 kDa en SDS-PAGE.

Application

• Western blotting (WB): 1:1,000 dilution
• Immunoprécipitation (IP): 1:100 dilution
• Cytométrie de flux (F): 1:100 dilution
• Immunofluorescence (IF): 1:50 dilution

Stockage

Conserver la poudre lyophilisée entre 2 et 8 °C dès réception. Une fois prête à l'emploi, la réhydrater avec 0,1 ml d'eau distillée et centrifuger si elle n'est pas limpide. Pour une conservation longue durée, prélever des aliquotes et les conserver à -20°C ou moins. Éviter les cycles répétés de congélation et de décongélation.

Donnés

>> Illustration de la carte épitopique: Cet anticorps reconnaît la région du site de clivage de la furine. Il détecte la protéine S2 et sa longueur totale.

>> Western blot (WB): Les protéines GST-Spike du SARS-CoV-2 (voie 1) et du SARS-CoV-1 (voie 2) ont été exprimées dans E. Coli. Un lysat bactérien a ensuite été préparé et dissous dans une SDS-PAGE à 10 %. L’homogénéité de la charge a été vérifiée avec l’anticorps anti-GST (2E5, #Mab1013) dans le panneau inférieur.

>> Western blot (WB): les extraits cellulaires de cellules HT1080 transfectées de manière stable, avec ou sans protéine de pointe du SARS-CoV-2, ont été résolus en SDS-PAGE à 10 %. L'homogénéité de la charge a été vérifiée avec l'anticorps anti-actine (9G8, #Mab2011) dans le panneau inférieur.

>> Immunoprécipitation (IP): Une quantité égale de lysat cellulaire entier provenant de cellules HT-1080 transfectées de manière stable et exprimant la protéine de pointe du SARS-Cov-2 a été incubée avec un contrôle d'isotype IgG de souris (voie 2) ou un anticorps monoclonal anti-pointe de souris (voie 3). La voie 1 présente quant à elle un apport de 10 %. L'analyse par Western blot a été réalisée avec le même anticorps monoclonal anti-pointe de souris.

>> Cytométrie de flux (F) : Les cellules vivantes du gène HT1080 transfecté de manière stable, avec ou sans expression de la protéine de pointe du SARS-CoV-2, ont été marquées avec un anticorps monoclonal de souris anti-pointe. L'anticorps secondaire utilisé était un anticorps de chèvre anti-IgG de souris (H+L) conjugué à l'Alexa Fluor™ 568.

>> Immunofluorescence (IF) : Images fluorescentes de cellules HT-1080 transfectées de manière stable, en présence ou en absence de la protéine de spicule du SARS-Cov-2, fixées et marquées avec un anticorps monoclonal de souris anti-spike. Un anticorps secondaire (rouge) a été utilisé avec de l'IgG de chèvre anti-souris (H+L) conjuguée à l'Alexa Fluor™ 568. Les noyaux ont été contre-colorés avec du Hoechst 33342 (bleu).

Remarque importante

Ce produit est destiné à la recherche uniquement et non à une utilisation dans des procédures thérapeutiques ou diagnostiques humaines.